生態(tài)環(huán)境
空氣 水質(zhì) 土壤 VOCs監(jiān)測(cè) 污染源 園區(qū)管控 督察執(zhí)法 環(huán)境應(yīng)急監(jiān)測(cè) 信息化軟件水生態(tài)
水利水務(wù)安全應(yīng)急
環(huán)境應(yīng)急檢測(cè)疾控衛(wèi)生
疾控監(jiān)測(cè)臨床診斷
臨床質(zhì)譜檢測(cè)半導(dǎo)體
半導(dǎo)體行業(yè)檢測(cè)材料科學(xué)
材料檢測(cè)石油石化
石油化工行業(yè)檢測(cè)工業(yè)過(guò)程
工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程檢測(cè)N-亞硝胺二甲胺(NDMA)是一種具有N-N=O 結(jié)構(gòu)的化合物,該化合物能與DNA反應(yīng)使其烷基化,進(jìn)而致癌。美國(guó)FDA曾爆出成品胃藥雷尼替丁中含有超過(guò)限量要求的亞硝胺類致癌物N-亞硝胺二甲胺,F(xiàn)DA 發(fā)布公告:召回美國(guó)市場(chǎng)上雷尼替丁產(chǎn)品,該公告中提到某些產(chǎn)品中的NDMA 含量會(huì)隨著時(shí)間推移而有所增加,進(jìn)而可能導(dǎo)致雜質(zhì)含量高于可接受水平。國(guó)內(nèi)外多家藥品生產(chǎn)企業(yè)都曾因消化系統(tǒng)藥雷尼替丁中檢出超限NDMA而啟動(dòng)召回。因此,監(jiān)管機(jī)構(gòu)以及生產(chǎn)商需要一種分析檢測(cè)方法,來(lái)檢測(cè)該類藥物中的N-亞硝胺二甲胺,切實(shí)保障人民用藥安全。LC-MS/MS 方法具有高靈敏度、高分辨力、快速分析、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì),可降低基質(zhì)干擾造成的假陰性或假陽(yáng)性發(fā)生可能性,可以滿足藥品檢測(cè)較嚴(yán)格的靈敏度、專屬性和準(zhǔn)確度要求。本文使用譜育科技EXPEC 5210三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng),開發(fā)適用于APCI源的LC-MS/MS方法,用于測(cè)試和定量雷尼替丁原料膠囊和片劑中的N-亞硝胺二甲胺。
實(shí)驗(yàn)部分
標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和設(shè)備
標(biāo)準(zhǔn)品:N-亞硝胺二甲胺標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定院,于-20℃冰箱保存。
樣品:鹽酸雷尼替丁膠囊,標(biāo)號(hào)136#、105#、104#、61#、12#
試劑:甲醇為色譜級(jí),購(gòu)自默克、甲酸為L(zhǎng)C-MS級(jí),購(gòu)自安譜。
儀器:ULC 510超高效液相色譜儀(具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱)、EXPEC 5210三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。
液相和質(zhì)譜條件
監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM),N-亞硝基二甲胺化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見下圖。
樣品前處理
參考質(zhì)譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0431)測(cè)定,具體前處理步驟如下:
鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備:取膠囊內(nèi)容物適量,相當(dāng)于雷尼替丁300mg,至50mL離心管中,精密加入甲醇10mL,渦旋混勻1min,再振蕩40min,離心,取上清液濾過(guò),取續(xù)濾液即得。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
線性:精密稱取N-亞硝基二甲胺對(duì)照品適量,加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1、2、5、10、50、100、250、500ng的溶液。按照上述方法依次進(jìn)樣分析,采用外標(biāo)法擬合后的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖1所示,不同濃度N-亞硝基二甲胺譜圖疊加圖如圖2所示。
圖1 N-亞硝基二甲胺標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖2 N-亞硝基二甲胺色譜疊加圖(線性不同濃度)
靈敏度:精密稱取N-亞硝基二甲胺對(duì)照品適量,加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1ng的溶液,該溶液進(jìn)樣測(cè)試色譜主峰的信噪比不低于10。
穩(wěn)定性:精密稱取N-亞硝基二甲胺對(duì)照品適量,加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含2ng的溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,峰面積的RSD值為2.34%,符合所得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過(guò)10%的要求。
加標(biāo)回收率:鹽酸雷尼替丁膠囊樣品136#中N-亞硝基二甲胺含量未檢出作為空白樣品,精密稱取300 mg后分別加入不同濃度的標(biāo)品,按照前處理步驟進(jìn)行前處理平行處理6個(gè),進(jìn)樣測(cè)試后計(jì)算回收率。加標(biāo)后溶液中N-亞硝基二甲胺濃度分別為:2 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL。
樣品測(cè)試結(jié)果
鹽酸雷尼替丁膠囊按照上述樣品前處理和儀器方法,樣品平行3次,每個(gè)平行樣品連續(xù)進(jìn)樣2次,最終取平均值作為測(cè)試結(jié)果,測(cè)試結(jié)果匯總?cè)缦卤?所示。
表4 鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中N-亞硝基二甲胺測(cè)試結(jié)果匯總表
*ND=Not Detected
圖3鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中N-亞硝基二甲胺測(cè)試譜圖
結(jié)語(yǔ)
本文使用譜育科技EXPEC 5210 LC-MS/MS對(duì)鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺含量進(jìn)行檢測(cè),考察方法的線性、靈敏度、穩(wěn)定性、加標(biāo)回收率。該方法簡(jiǎn)單靈敏準(zhǔn)確,可以較好地滿足鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺的檢測(cè)要求。
完整報(bào)告下載:LC-MSMS法測(cè)定鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺
附錄
設(shè)備與耗材方案
一、EXPEC 5210 配置詳情
二、標(biāo)準(zhǔn)品
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